神经生长因子预处理对抗谷氨酸诱导海马神经元损伤：作用途径涉及PTEN？
胡亚娥，茅家慧，朱燕，周爱玲^△
（南通大学医学院病理生理学教研室，江苏 南通 226001）
第一作者：胡亚娥，女，1976年9月生，硕士，讲师，主要从事神经退行性疾病发病机制及防治研究，huli0120@ntu.edu.cn.
^△通讯作者：周爱玲，女，1951年2月生，硕士，教授，主要从事神经退行性疾病发病机制及防治研究，alz@ntu.edu.cn.
江苏省自然科学基金资助项目（BK2004048）；南通市应用研究科技计划项目（K2008009）。
摘要
背景：现有的研究结果已证实神经生长因子减轻谷氨酸诱导海马神经元损伤，第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失的基因（PTEN）有促进神经元凋亡的作用，但PTEN其在神经生长因子（NGF）预处理对抗谷氨酸诱导的海马神经元损伤中的表达情况和作用尚无明确证实。
目的：课题希望明确目前尚不清楚的神经生长因子预处理减轻谷氨酸诱导海马神经元损伤与PTEN的关系。
设计、时间及地点：对比观察，体外实验，于2007-10/2008-03在南通大学医学院病理生理学实验室完成。
材料：谷氨酸、神经生长因子、DAPI、MTT和LDH试剂盒均购自美国Sigma公司。荧光显微镜和倒置相差显微镜均购自日本Olympus公司。
方法：取新生24 hr的SD大鼠的海马神经元原代培养7d，然后分别进行如下干预：对照组中未加干预因子；谷氨酸组培养体系中加入终浓度为0.2mmol/L的谷氨酸；神经生长因子组在谷氨酸处理前，培养体系中加入终浓度分别为10、50、100、200μg/L的神经生长因子。
主要观察指标：采用MTT和LDH法检测神经生长因子对谷氨酸损伤的细胞活性的影响，光镜下观察海马神经元形态变化，采用DAPI染色法检测海马神经元凋亡，采用RT-PCR法和Western blot法测定肿瘤抑制因子PTEN的mRNA及蛋白在海马神经元中的表达。
结果：谷氨酸组海马神经元细胞活性与对照组比较明显降低（P<0.01），乳酸脱氢酶释放增加（P<0.01）。神经生长因子可明显提高谷氨酸损伤的海马神经元的细胞活性且随着剂量增加，作用逐渐增强（P<0.05或P<0.01）。神经生长因子预处理可对抗谷氨酸致海马神经元的凋亡数量的增加及肿瘤抑制因子PTEN mRNA和蛋白表达的上升（P<0.01）。
结论：神经生长因子预处理能减少PTEN的表达，抑制神经元凋亡，对谷氨酸诱导的海马神经元损伤起到了保护作用。
关键词：神经生长因子；谷氨酸；肿瘤抑制因子PTEN；海马神经元

中文全文见附件。

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