以脑脊液培养移植用嗅鞘细胞的可行性
吴卫江1 2  兰青2* 陆华1 朱爱华1 蒋云召1 陈革1 惠国桢3
（1无锡市第三人民医院神经外科，江苏省无锡市，214041；2苏州大学附属第二医院；3苏州大学附属第一医院，江苏省苏州市，215006）
吴卫江，男，1967年生，在读博士，副主任医师，硕士生导师，研究方向神经修复和再生研究。Wuwj2004@sohu.com
*通讯作者：兰青，男，1964年生，博士，主任医师，博士生导师，研究方向神经外科"锁眼"微创手术、脑胶质瘤的基础研究：单克隆抗体的导向诊断与治疗，基因工程制备肿瘤疫苗。szlq006@yahoo.com.cn
国家973创伤项目（2005CB522600）
【摘要】
背景：国内有学者应用脑脊液作为神经干细胞的诱导剂进行干细胞的体外培养，应用于嗅鞘细胞培养者尚未见报道。
目的：观察鼻黏膜嗅鞘细胞在正常脑脊液中的生长情况，探讨脑脊液用于培养移植用嗅鞘细胞的可行性。
设计：完全随机区组设计实验。
时间及地点：实验于2008-08在无锡市第三人民医院细胞实验室和江苏省血吸寄生虫病防治研究所完成。
材料:DMEM/F12培养基、胎牛血清购自GIBCO/BRL，鼠抗P75单抗、兔抗GFAP多抗购自Santa Curz，鼠抗MBP单抗购自Cymbus，鼠抗MAP2单抗购自Transduction Laboratories，FITC结合的兔抗鼠单抗购自Boster，TRITC结合的羊抗兔单抗购自Sigma。
方法：鼻黏膜嗅鞘细胞分别应用DMEM/F12培养基、脑脊液及其组合方式进行体外培养。普通级成年雌性SD大鼠建立脊髓半切洞损伤模型，分别应用脑脊液、DMEM/F12培养的鼻黏膜嗅鞘细胞移植修复神经损伤。
主要观察指标：应用四甲基偶氮唑盐比色法检测脑脊液培养条件下嗅鞘细胞的增殖情况，免疫组化法比较各组的嗅鞘细胞形态及纯度；BBB评分对实验动物进行行为学评价、HRP-TMB逆行示踪技术及免疫组化方法比较常规细胞培养方法同应用脑脊液进行培养后的嗅鞘细胞对神经损伤的修复能力。
结果：DMEM/F12培养1周后更换脑脊液培养的嗅鞘细胞增殖能力在14d时并没有弱化，对细胞的增殖能力不会造成很大的影响，细胞形态及纯度也无明显变化。与传统方法培养的嗅鞘细胞相比，中途更换脑脊液进行培养的嗅鞘细胞移植修复脊髓损伤大鼠的轴索再生时，同样可以帮助再生轴突髓鞘化，使再生轴索恢复电生理传导，帮助原已失去神经支配的肌纤维恢复运动能力。运用这2种方法移植修复的大鼠的行为功能的恢复和神经元的再生情况，差异无显著性。
结论：结果显示，使用脑脊液培养作为自体细胞移植前的过渡，临床上是可行的。
【关键词】脑脊液；嗅鞘细胞；体外培养

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