阿霉素诱导慢性心力衰竭大鼠心脏自主神经纤维的再生：Akt基因转染的骨髓间充质干细胞有促进作用吗？
孔宏亮1，2，李占全2，赵淑梅3，朱莉3，齐国先1
1中国医科大学附属第一医院心内科，辽宁省沈阳市 110001，中国
2辽宁省人民医院心内科，辽宁省沈阳市  110016，中国
3沈阳师范大学，辽宁省沈阳市  110034，中国
孔宏亮，男，1968年生，河南省禹县人，汉族，博士，主治医师，研究方向：干细胞心肌成形治疗研究   E-mail：khl339@sina.com
通讯作者：齐国先，博士，教授，主任医师，中国医科大学附属第一医院。
Email：qgx2002@medmail.com.cn
辽宁省高等学校科研项目（（辽）20088248）
摘要：
背景：Akt基因转染的骨髓间充质干细胞（Akt-MSCs）移植后可修复梗死心肌，改善心功能，但其对心力衰竭心脏自主神经的影响鲜见报道。
目的：建立阿霉素诱导慢性心力衰竭模型，观察Akt-MSCs对该模型大鼠心脏自主神经再生的影响，探寻介导此作用的因子。
材料：兔抗鼠胆碱乙酰基转移酶、生长相关蛋白43、突触素多克隆抗体，SABC （strept avidin-biotin complex）结合的羊抗兔Ig G均购自武汉博士德生物工程有限公司。Cat-A-Kit分析系统购自Amersham; Arlington Heights, IL, USA。
方法：（1）分离培养成年大鼠骨髓间充质干细胞,构建Akt-MSCs。（2）将雄性成年大鼠40只每3天以2 mg/kg剂量心肌内注射阿霉素，然后每周1次，共5次，建立慢性心力衰竭模型。最后一次阿霉素给药后2周，34只慢性心力衰竭造模成功大鼠随机分为3组：Akt-MSCs组11只，单纯MSCs组11只和对照组12只，分别尾静脉内注射含2×106 Akt-MSCs的100μL PBS，或含2x106 MSCs的100μL PBS，或100μL PBS，1次/d，共3次。
主要观察指标：阿霉素给药结束后4周，用Cat-A-Kit分析系统检测心肌去甲肾上腺素含量，进行胆碱乙酰基转移酶、突触素和生长相关蛋白43免疫组化和Western Blot检测。阿霉素给药前，给药结束后2和4周进行心脏超声检查,测左室射血分数。
结果：心肌去甲肾上腺素含量，突触素和生长相关蛋白43染色阳性的神经元密度及表达,以及射血分数：Akt-MSCs组>单纯MSCs组>对照组（P<0.05或P<0.01）。心肌胆碱乙酰基转移酶表达：Akt-MSCs组与单纯MSCs组相近，但均高于对照组(P<0.05)。去甲肾上腺素含量与左室射血分数呈明显负相关(r=-0.64, P=0.015)。
结论：MSCs移植尤其是Akt基因转染的间充质干细胞可心脏自主神经功能，促进心脏自主神经纤维的再生，该作用可能被生长相关蛋白43介导。
关键词：间充质干细胞；Akt基因转染；慢性心力衰竭；神经纤维再生；植物神经系统

中文全文见附件。

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