骨髓间充质干细胞向许旺细胞体外分化：富血小板血浆有明确诱导效应吗？
夏长所，杨选影，孙康，张才龙，田少奇（青岛大学医学院附属医院骨科，山东省青岛市  266003）
夏长所，男，1962年生，博士，副教授，研究方向：周围神经损伤。Xcs009@163.com
摘要
背景：骨髓间充质干细胞在特定诱导剂作用下能分化为许旺细胞，但其诱导和培养过程复杂，应用的生长因子较多，受外界干扰的概率也较大。
目的：探讨富含多种生长因子的富血小板血浆诱导兔骨髓间充质干细胞在体外向许旺样细胞分化的可行性，并对分化细胞的分泌功能进行检测。
设计、时间及地点：以细胞为实验对象，对比观察，于2008-10在青岛大学医学院附属医院实验动物中心完成。
材料：富血小板血浆和骨髓间充质干细胞分别来源于2 月龄新西兰白兔股静脉血和骨髓。兔神经生长因子 ELISA Kit 试剂盒和兔神经生长因子 PCR Kit 试剂盒均购自深圳晶美生物工程有限公司；抗兔S-100 免疫荧光染色Kit 试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司。
方法：取培养至第3代骨髓间充质干细胞，分别进行如下干预：联合诱导组，采用1 mmol/Lβ- 巯基乙醇和用含10% FBS 的35 ng/mL 维甲酸序贯诱导后用含富血小板血浆完全培养基培养；单纯诱导组，行与联合诱导相同的β- 巯基乙醇和维甲酸序贯诱导后，仅用L-DMEM 完全培养基培养；对照组，仅用L-DMEM 完全培养基培养。
主要观察指标：倒置显微镜下观察各组细胞生长情况。采用免疫荧光染色法对骨髓间充质经诱导后S-100 蛋白表达进行鉴定。ELISA 法检测经诱导分化的骨髓间充质细胞上清液中神经生长因子含量，行RT-PCR 检测经诱导分化的骨髓间充质细胞中神经生长因子mRNA 表达。
结果：诱导培养9 d 时联合诱导组细胞均呈类似许旺细胞的形态，单纯诱导组大部分细胞呈类似许旺细胞的形态，对照组细胞形态一直无明显改变。联合诱导组和单纯诱导组骨髓间充质干细胞经诱导培养后均有S-100蛋白表达，且培养7，9，11 d 时，联合诱导组S-100阳性细胞表达率更高（P < 0.05）。培养4，7，9，11 d时，联合诱导和单纯诱导组细胞上清液中神经生长因子含量明显高于对照组（P < 0.05）；培养7，9 和11 d时，联合诱导组明显高于单纯诱导组（P < 0.05）。培养11 d时，联合诱导组诱导分化的细胞神经生长因子mRNA表达明显高于单纯诱导组（P <0.05）。
结论：诱导培养时联合富血小板血浆能明显提高骨髓间充质干细胞向可分泌神经生长因子的许旺样细胞分化的效率。
关键词：间充质干细胞；许旺样细胞；诱导；分化

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