全脑缺血再灌注大鼠大脑皮质DNA修复蛋白XRCC1和DNA修复酶Ku70 mRNA的表达：茶氨酸干预的神经保护作用与此有关吗？
薛荣亮，陈文超，王 宁，李莎莎
西安交通大学医学院第二附属医院麻醉科，陕西，西安，710004
薛荣亮，男，1960年生，陕西省人，汉族，1984年西安医科大学毕业，教授、主任医师，主要从事缺血性脑损伤机制与保护方面的研究； E-mail: xuerl@china.com
通讯作者：薛荣亮，同上。
国家自然科学基金资助课题（30571790）

背景：许多研究发现脑缺血再灌注后的细胞凋亡是一个具有时间依赖性的动态演变过程，尚未凋亡的细胞会随着再灌注时间的延长和DNA损伤的逐渐累积而最终导致凋亡。近年来的研究表明，茶氨酸具有脑保护作用，但茶氨酸对脑损伤后DNA的修复功能有无影响尚未查到相关报道。
目的：探讨茶氨酸干预对大鼠全脑缺血再灌注后不同时点大脑皮质细胞凋亡及DNA修复蛋白XRCC1和DNA修复酶Ku70 mRNA表达的影响。
设计、时间和地点：随机对照动物实验于2007-04/10在西安交通大学动物实验中心药理楼实验室完成。
材料：茶氨酸购自武汉远程科技有限公司，XRCC1，Ku70和GAPDH引物由上海生工生物公司合成。
方法：健康雄性SD大鼠216只，随机分为3组：假手术组、缺血再灌注组和茶氨酸干预组，每组根据术后存活时间不同再分为2，6，12，24，48和72 h 6个亚组，12只/亚组。采用四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型，茶氨酸干预组术后即时经尾静脉注射1 000 mg/kg茶氨酸，假手术组和缺血再灌注组注射生理盐水4 mL/kg，此后每隔24 h重复等量注射。
主要观察指标：HE染色观察大脑皮质神经元细胞形态；流式细胞仪检测大脑皮质细胞凋亡；荧光Real-time RT-PCR方法检测大脑皮质XRCC1和Ku70 mRNA表达。
结果：假手术组神经元细胞形态完整，缺血再灌注组神经元细胞形态不完整，茶氨酸干预组介于上述2组之间。缺血再灌注组各时间点大脑皮质神经元凋亡率均明显高于假手术组（P<0.05），茶氨酸干预组在手术后6～72 h凋亡率明显低于缺血再灌注组，高于假手术组（P<0.05）。缺血再灌注组各时间点大脑皮质XRCC1和Ku70 mRNA表达均明显低于假手术组（P<0.05），茶氨酸干预组在手术后6～72 h XRCC1 mRNA表达均明显低于假手术组，高于缺血再灌注组（P<0.05），茶氨酸干预组在术后2～12 h Ku70 mRNA相对表达量明显低于假手术组（P<0.05），在术后6～72 h Ku70 mRNA相对表达量明显高于缺血再灌注组（P<0.05）。
结论：大鼠全脑缺血再灌注时细胞凋亡率在再灌注24 h后增至高峰，但DNA修复蛋白在再灌注2 h就开始下降，茶氨酸干预产生了拮抗大鼠全脑缺血再灌注时大脑皮质XRCC1与Ku70 mRNA表达下降的作用。
[关键词] 脑；缺血再灌注损伤；XRCC1；Ku70；茶氨酸

中文全文见附件。

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