重组质粒pCDNA3.1/Ngb对局灶性脑缺血大鼠的脑保护作用?
朱继，唐文渊 （重庆医科大学附属第一医院神经外科，重庆市  400016）
朱继，男，1965年生，重庆市人. 医学博士，副教授，副主任医师，主要从事神经外科脑血管病研究。
E-mail: a68690569@cta.cq.cn，a68690569@sina.com
重庆市卫生局资助项目（06-2-177）
摘要：
背景：目前关于神经球蛋白在基因工程中应用的研究所用载体主要集中于腺病毒，其转染率虽较高，但具有易发基因突变、细胞毒性、可致炎性，外源基因含量少诸多缺点。
目的：实验以质粒pCDNA3.1(+)为载体，以Bcl-2，细胞凋亡和脑梗死体积为指标，观察pCDNA3.1(+)/Ngb对局灶性脑缺血的脑保护作用。
设计、时间及地点：基因工程，随机对照动物实验，于2006-05/2007-01在重庆医科大学实验室完成。
材料：TTC(2,3,5-三苯基氯化四氮唑)购至上海生物工程公司。兔抗大鼠Bcl-2多抗、兔抗大鼠β-actin单抗、FITC标记的山羊抗兔IgG购自Sigma公司。TUNEL凋亡试剂盒购自德国Roche公司。
方法：将54只成年雄性大鼠随机分为3组：生理盐水组、空质粒组和重组神经球蛋白组，每组18只。分别于大脑皮质区半暗带两部位注射生理盐水、1μg/μL质粒pCDNA3.1(+)和1μg/μL重组质粒pCDNA3.1(+)/Ngb各3.3 mL,并于注射后24h采用线栓法制备大脑中动脉缺血模型。
主要观察指标：脑缺血24h后，采用TTC染色检测大鼠大脑梗死情况，TUNEL法检测大鼠注射处缺血半暗带细胞凋亡，间接免疫荧光法和Western blot检测大鼠注射处缺血半暗带Bcl-2蛋白表达。
结果：经重组质粒pCDNA3.1（+）/Ngb处理的大鼠大脑梗死体积和注射处缺血半暗带凋亡细胞数较生理盐水组和空质粒组显著减少(P<0.01)，注射处缺血半暗带Bcl-2阳性细胞面积百分比显著增加(P<0.01)，Bcl-2蛋白的表达上升40%～50％。
结论：质粒pCDNA3.1(+)介导神经球蛋白基因转入脑缺血大鼠脑内，可上调Bcl-2表达，抑制半暗带细胞凋亡，从而发挥了脑保护作用。
关键词：神经球蛋白；脑缺血；神经细胞；bcl-2基因

中文全文见附件。

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