利福平预处理与延迟处理对鱼藤酮诱导多巴胺能神经元凋亡及α突触核蛋白表达的比较
孙元林，张国华，徐杰，陈世文，陶恩祥
中山大学附属第二医院神经科，广东省广州市 510120
孙元林，男，1972年生，在读博士，副教授，主要从事帕金森病病因及防治的研究。
E-mail:sy10l@yahoo.com.cn
通讯作者：陶恩祥，博士，教授，博士生导师；主要从事帕金森病方面的研究。
E-mail: taoenxiang@yahoo.com.cn       
广东省自然科学基金（04009355）；广东省科技计划项目（05B33801003）
摘要
背景：研究表明利福平可抑制α突触核蛋白多聚体的形成，对1-甲基- 4-苯基- 1, 2, 3, 6-四氢吡啶诱导PC12细胞的凋亡具有保护作用。
目的：比较利福平预处理与延迟处理对鱼藤酮诱导的帕金森病模型大鼠黑质区酪氨酸羟化酶和α突触核蛋白表达的影响。
设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2006-11/2008-10在中山大学北校区实验动物中心完成。
材料：利福平购自美国MD公司；鱼藤酮购自美国Sigma公司；小鼠抗大鼠α突触核蛋白单克隆抗体购自美国BD公司；兔抗大鼠酪氨酸羟化酶单克隆抗体购自美国Chemicon公司。
方法：将雄性8周龄SD大鼠72只随机分为5组：空白对照组（n=12），利福平对照组（n=12），鱼藤酮组（n=16），利福平预处理组（n=16）和利福平延期处理组（n=16）。后3组大鼠连续3周皮下注射鱼藤酮1.5mg/（kg·d）建立帕金森动物模型。利福平预处理组和利福平延期处理组分别在鱼藤酮注射前3d和鱼藤酮注射后7d灌胃给予利福平30mg/（kg·d）；空白对照组和利福平对照组分别皮下注射1mL/（kg·d）的葵花油和灌胃30mg/（kg·d）利福平，连续3周。
主要观察指标：于第3周末，采用HE染色观察黑质区多巴胺神经元的病理变化，采用免疫荧光和Western blot方法检测黑质区酪氨酸羟化酶和α突触核蛋白的表达。于用药前及第3周末采用mNSS评分观察大鼠的行为学变化。
结果：HE染色可见鱼藤酮组黑质区神经元数量明显减少，且残存神经元变性、色素减少，核固缩。利福平延期处理组和利福平预处理组黑质致密部多巴胺神经元数量较鱼藤酮组明显增多（P＜0.01），且损伤程度较低。与鱼藤酮组比较，利福平延期处理组和利福平预处理组黑质区酪氨酸羟化酶的表达明显增加（P＜0.01），α突触核蛋白的表达明显减少（P＜0.01），mNSS评分明显降低（P＜0.01），均以利福平预处理组效果更明显。空白对照组和利福平对照组比较，黑质区酪氨酸羟化酶、α突触核蛋白的表达及mNSS评分差异均无显著性意义（P>0.05）。
结论：利福平可以明显减轻鱼藤酮诱导的帕金森模型大鼠黑质区的病理损伤，促进黑质区酪氨酸羟化酶的表达，抑制α突触核蛋白的表达，改善大鼠的神经功能。利福平预处理效果优于利福平延期处理。
关键词：利福平；鱼藤酮；帕金森病；α突触核蛋白；多巴胺能神经元

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