原花青素逆转β-淀粉样肽（25-35）诱导去血清培养PC12 细胞S期阻滞：上调p53基因
梅寒芳^1,2，谢朝阳³ ，祝其锋^{3 *
1}广东药学院生物化学与分子生物学教研室，广东省广州市 510006  
²南方医科大学热带医学与公共卫生学院，广东省广州市 510515
³广东医学院生物化学与分子生物学研究所，广东省湛江市 524023
梅寒芳，女，1977年生，南方医科大学热带医学与公共卫生学院病原生物学专业2007级在读博士，讲师，主要从事衰老生化及抗菌肽研究。E-mail：meihf37@163.com，
通讯作者：祝其锋，男，学士，教授，硕士生导师，主要从事衰老生化研究。E-mail：zhuqifeng3@163.com，0759-2388850。
广东省重点学科重点项目（9808）

背景：目前关于细胞凋亡与老年性痴呆的研究，多半在探讨凋亡的信号转导途径，而从细胞周期变化的角度和p53对细胞周期调控的层面去探讨原花青素的保护机制还未见报道。
目的：观察原花青素干预对β-淀粉样肽（25-35）[βamyloid peptide -(25-35)，Aβ_25-35]诱导的去血清培养PC12细胞的凋亡、细胞周期分布的影响及p53基因的表达，从细胞周期角度探讨原花青素的神经元保护作用的分子机制。
设计、时间及地点：细胞分子水平的平行对照实验，于2006-07/2008-07在广东医学院生物化学与分子生物学研究所完成。
材料：原花青素购自南京学子医化研发中心；Aβ_25-35 购于美国Sigma公司；PC12细胞由军事医学科学院基础医学研究所提供；兔抗P53多克隆抗体购自美国Santa Cruz公司。
方法：无血清培养PC12细胞24h，模型组加终浓度为25μmol/L 的Aβ_25-35处理24h；药物保护组用终浓度为30mg/L的原花青素预处理1h，再加终浓度为25μmol/L的 Aβ_25-35处理24h；对照组不加任何药物，正常培养。
主要观察指标：流式细胞仪检测细胞周期分布情况及细胞凋亡率；RT-PCR 检测 p53基因 mRNA 的表达；Western blot检测 P53蛋白含量。
结果：PC12细胞经25μmol/L的 Aβ_25-35处理24h，细胞凋亡率和S期百分率均明显升高（P<0.01），p53 mRNA和蛋白表达水平明显降低；原花青素预处理1h可逆转Aβ_25-35引起的PC12细胞凋亡率和S期百分率的升高（P<0.01），同时促进p53 mRNA和蛋白表达。
结论：原花青素可对抗Aβ_25-35 诱导的去血清培养 PC12 细胞的凋亡及细胞周期S期阻滞，其机制可能与上调p53基因表达有关。
[关键词]  原花青素；Aβ_25-35； PC12细胞；p53

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