姜黄素预处理对TNF-α诱导大鼠海马神经元损伤的结构性保护作用：或与抑制神经元Ca²⁺内流有关？
郭鲁燕
摘要
背景：目应关于姜黄素的研究主要方向是利用其细胞毒性进行抗肿瘤治疗，将姜黄素应用于神经系统疾病防治的研究鲜见。
目的：结合原神经元原代培养技术、荧光激光共聚焦扫描技术，观察了姜黄素对炎症因子TNF-α诱导的大鼠海马神经元损伤的结构性保护作用，以及姜黄素对TNF-α损伤神经元后细胞Ca²⁺内流的干预效应。
设计、时间及地点：细胞形态学和生理学的对比观察性体外实验，于2006-12/2007-06在暨南大学医学院脑研究室完成。
材料：姜黄素和TNF-α购自美国Sigma公司，钙离子荧光探针Fluo3/AM购自美国Molecularprobes。倒置显微镜（BX-51）购自日本Olympus公司。LSM 510 confocal laser scanning microscope购自Zeiss，Germany。
方法：取自新生1天SD大鼠海马神经元，进行原代培养5d后，分别：用含10%胎牛血清的DMEM培养基培养（对照）；在此基础上加入100ng/mL TNF-α或/和1μmol/L姜黄素培养（联合干预时，姜黄素加入在先）。然后用倒置显微镜对神经元进行1h动态形态学观察，并在药物理处理后48h，静态观察神经元生长状况和形态变化。原代培养7d后，分别：用含10μL PBS的DMEM培养基培养（对照）；在此基础上加入4.5ng/mL TNF-α或/和1μmol/L姜黄素培养（联合干预时，姜黄素加入在先）。用Fluo3/AM荧光标记法观察神经元内钙离子浓度变化。
主要观察指标：姜黄素对TNF-α诱导的海马神经元结构性损伤和Ca²⁺内流的效应。
结果：（1）100ng/mL的TNF-α可以明显抑制原代培养的大鼠海马神经元的生长。在倒置显微镜下动态观察神经元1h，发现：神经元胞体肿胀，轴突和次级分支逐渐缩短，甚至消失。加入TNF-α48h后，从静态摄片中看到神经元生长稀疏，胞体较小，几乎没有轴突和次级分支从胞体长出，不能形成网状结构。而预先加入1μmol/L的姜黄索，再加入TNF-α，神经元可以正常生长，胞体相对大而丰满，轴突和许多次级分支从神经元胞体分出，形成网状结构。（2）TNF-α可以诱导Ca²⁺快速内流入胞浆，加入TNF-α后Ca²⁺荧光强度立即增强，但当姜黄素和TNF-α共同作用于神经元时，Ca²⁺荧光强度仅轻微升高。
结论：姜黄素可能通过降低TNF-α诱导的Ca²⁺快速内流，维持胞浆Ca²⁺稳态对大鼠海马神经元产生结构性保护作用。
关键词：姜黄素；TNF-α；原代培养；Ca²⁺；人类免疫缺陷病毒1相关性痴呆

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