体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞向许旺样细胞诱导分化过程中S100蛋白的表达
李文婷 许增禄 丁斐 顾晓松
摘要:
背景：S100蛋白本身有促进轴突生长的作用,把这些经诱导分化后的骨髓间充质干细胞移植到体内将会形成一个有利于神经再生过程的微环境。
目的: 首次进行骨髓间充质干细胞体外向许旺样细胞分化过程中S-100蛋白表达从基因到蛋白水平的详细分析。
设计、时间及地点：细胞学实验于2006-02/2007-05在南通大学神经再生重点实验室完成。
材料：兔抗S100多克隆抗体购自Dako, Denmark；小鼠抗大鼠S100单克隆抗体购自Sigma, USA。
方法：从成年SD大鼠的股骨和胫骨中分离培养骨髓间充质干细胞。采用MTT法检测细胞的增殖情况，应用流式细胞术检测细胞周期和表面标志物CD分子的方法研究骨髓间充质干细胞的特性。应用复合诱导因子（BME, RA ,FSK, bFGF, PDGF, HRG）体外连续诱导骨髓间充质干细胞向许旺样细胞分化。诱导分化后采用免疫荧光细胞化学染色检测骨髓间充质干细胞中S100蛋白，胶质纤维酸性蛋白, 神经生长因子低亲和力受体p75表达，应用流式细胞仪和RT-PCR方法分别检测S100蛋白及其mRNA的表达变化。
主要观察指标：S100蛋白及其mRNA表达。
结果: 骨髓间充质干细胞在体外易扩增，传1~8代以内的细胞增殖能力无明显变化。未经诱导的骨髓间充质干细胞大部分处于G0和G1期。诱导分化后的骨髓间充质干细胞形态上发生了类似许旺细胞的变化。骨髓间充质干细胞在诱导过程中S100的mRNA有上升的趋势; 通过免疫荧光方法观察到诱导7 d后 骨髓间充质干细胞表达并且表达S100蛋白，GFAP, 神经生长因子低亲和力受体p75明显升高。另外，通过Western Blot和流式细胞仪进一步定量地检测到诱导分化过程中骨髓间充质干细胞表达S100蛋白增高。
结论: 骨髓间充质干细胞在体外条件下向许旺细胞的诱导分化的过程中，从基因水平和蛋白的水平上表达S100蛋白都有上升的趋势。

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