大鼠局灶性脑缺血早期的特异性蛋白质的表达：差异荧光双向凝胶电泳法
马学玲^1.2 杨薇² 江新梅² 李福春³ 李霞² 叶琳琳¹ 刘亢丁^2＊
1 哈尔滨医科大学附属第四医院神经内科，黑龙江省哈尔滨市，150001  
2 吉林大学第一医院神经内科，吉林省长春市，130021
3 哈尔滨医科大学附属第一医院骨科，黑龙江省哈尔滨市，150001
第一作者：马学玲，女，1976年12月出生，讲师，博士（毕业于吉林大学），主治医师，研究方向:脑血管病,主要从事神经内科，email：marlenexl@163.com,
通讯作者：刘亢丁，女，1959年5月出生，博士(后)，教授，主任医师，研究方向:脑血管病,主要从事神经内科，email：kangdingliu@163.com,
国家自然科学基金(30470588)
摘要：
背景：有研究已证实荧光差异双向凝胶电泳可以解决传统双向凝胶电泳可重复性差及系统误差大等缺点，但目前应用此技术研究缺血性脑血管病机制的报道较少，以往有关缺血性脑血管病蛋白质组学研究的对象多为血浆和体液。
目的：课题设计了以先进的荧光差异双向凝胶电泳法检测大鼠大脑中动脉闭塞后6h缺血周边区新鲜脑组织的蛋白质组学分析期望，寻找缺血性脑血管病早期与疾病密切相关的特异性蛋白。
设计、时间及地点：蛋白质组学随机对照动物实验，实验于2006-01/06在吉林大学神经病学实验室及蛋白质组学实验室完成。
材料：氯化三苯四氮唑购自美国Sigma公司。Ettan IPGphorII等电聚焦仪、Ettan DALTSix电泳系统、DeCyder DIA V5.0差异分析软件和Ettan MALDI-TOF质谱仪均购自瑞典Amersham Bioscience公司。
方法：将健康雄性Wistar大鼠8只随机分为局灶性脑缺血组和对照组，4只/组。局灶性脑缺血线栓法制作大鼠局灶性脑缺血大脑中动脉闭塞模型。对照组大鼠操作至暴露颈内、颈外动脉后即缝合其余处理同脑缺血组。
主要观察指标：应用荧光差异双向凝胶电泳方法，比较大鼠局灶性脑缺血大脑中动脉闭塞模型脑缺血后6h缺血周边区与正常组相应部位蛋白质的变化；采用DeCyder DIA V5.0软件分析选出两组间蛋白表达量差异具有统计学意义(P<0.05)并且归因危险度>1.4的蛋白点；基质辅助激光解析/电离-飞行时间质谱鉴定有差异的蛋白。
结果：大脑中动脉闭塞模型大鼠脑组织氯化三苯四氮唑染色见正常脑组织呈粉红色，缺血区脑组织呈白色，证实造模成功。DIGE图谱的匹配分析4块胶的平均匹配率为92.4%，各胶上平均含有(1758±43)个蛋白点，分布模式基本一致。局灶性脑缺血后6h，局灶性脑缺血组与对照组相比，脑缺血组有13个蛋白点表达量显著改变，其中7表达量增加，其他6个表达量下降（P＜0.05）；质谱鉴定出两个差异点为α-微管蛋白及热休克蛋白27，脑缺血组与对照组表达量相比2者均显著减少（P＜0.05）。
结论：用DIGE蛋白质组学方法可发现13个蛋白点变化，其中α-微管蛋白和热休克蛋白27在脑缺血早期含量明显减少，可能是缺血性脑血管病的早期相关蛋白之一。
关键词：荧光差异双向凝胶电泳；脑缺血；质谱；蛋白质组学；大鼠

中文全文见附件。

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