蛛网膜下腔出血性脑损伤后细胞外信号调节激酶变化及神经递质的调控
宋锦宁，王文博，隋龙（西安交通大学医学院第一附属医院神经外科，陕西省西安市，710061）
宋锦宁，男，1962年生，博士，教授，博士生导师，研究方向：脑血管病与脑肿瘤的基础与临床。E-mail：jinnings@126.com
基金项目：国家高技术研究发展计划“863计划”资助项目（2006AA02Z4Z4）；国家自然科学基金资助项目（30870844）；教育部高层次创造性人才计划《新世纪优秀人才支持计划》资助项目（NECT-05-0831）
摘要
背景：国内外对脑血管痉挛与蛛网膜下腔出血的研究较少关注神经细胞损伤的内容，且缺少蛛网膜下腔出血过程中神经递质对细胞外信号调节激酶1/2调控的相关报道。
目的：从神经细胞凋亡的信号转导角度，观察神经递质对细胞外信号调节激酶1/2的调控作用，探讨蛛网膜下腔出血后的脑损伤机制。
设计：完全随机分组，对照动物实验。
时间及地点：实验于2008-03/12在西安交通大学医学院实验中心完成。
材料：细胞外信号调节激酶1/2多克隆抗体和SP试剂盒均购自北京博奥森公司；DAB显色盒购自北京中山公司；TUNEL试剂盒购自美国promega公司。
方法：将114只SD大鼠（鼠龄55~63d）随机分为5组：蛛网膜下腔出血模型组30只，盐水对照组30只，穿刺对照组30只，正常对照组6只，神经递质干预组18只。枕大池二次注血法建立大鼠蛛网膜下腔出血动物模型。神经递质干预组根据脑室给予的不同药物分为乙酰胆碱组，去甲肾上腺素组，盐水干预组3个亚组，每组6只。
主要观察指标：SAH模型组、盐水和穿刺对照组建立模型后6h，12h，24h，3d和5d取材，每个时间点取6只。正常对照组在实验6h后取材。神经递质干预组为造模后3d取材。应用HE染色观察细胞形态学变化，免疫组化SP方法检测细胞外信号调节激酶1/2在大鼠皮质中的动态表达，TUNEL法检测大鼠皮质神经细胞凋亡情况。
结果：蛛网膜下腔出血模型组神经组织水肿，神经细胞出现不同程度的凋亡和坏死。蛛网膜下腔出血后6h 细胞外信号调节激酶1/2染色阳性细胞开始出现在皮质，12h达高峰，此后阳性细胞逐渐减少。神经细胞凋亡在蛛网膜下腔出血6h时即可发生，24h达到高峰。细胞外信号调节激酶1/2分布部位与凋亡细胞的分布有很大程度的重叠性。蛛网膜下腔出血模型组细胞外信号调节激酶1/2阳性细胞率和细胞凋亡率较3个对照组均显著升高（P <0.05）。与盐水干预组比较，乙酰胆碱可下调细胞外信号调节激酶1/2的表达，减少神经细胞凋亡（P<0.05）。去甲肾上腺素可上调细胞外信号调节激酶1/2的表达，但与盐水干预组比较，神经细胞凋亡差异不明显（P >0.05）。
结论：蛛网膜下腔出血后早期脑皮质即出现凋亡细胞，此后呈现规律性动态表达，并且细胞外信号调节激酶1/2的活化早于凋亡。乙酰胆碱可下调细胞外信号调节激酶1/2的表达，使神经细胞凋亡减少。
关键词：细胞外信号调节激酶；蛛网膜下腔出血；凋亡；神经递质

中文全文见附件。

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