文题：铅对原代培养大鼠海马神经元细胞周期、DNA损伤和cyclin D1表达的影响：有剂量依赖效应吗？
发表：《中国神经再生研究（英文版）》杂志2010年第 期第221-225页
作者：高双，Liguang Sun, Yuanyuan You
单位：中国医科大学生物化学教研室，沈阳，辽宁省，110001
基金项目：国家自然基金（NO.39970651）

文章摘要 
背景：大量研究证实，海马是铅作用于神经系统时导致神经损害的主要靶点部位之一，但其作用的分子生物学机制，包括铅对细胞周期的影响至今未明。
目的：首次设计不同浓度铅对原代培养大鼠海马神经元的细胞周期、DNA损伤和cyclin D1表达影响的实验观察。
设计、时间及地点：随机对照体外实验，于2008-07/2009-05于中国医科大学完成。
材料：cyclinD1 and-actin抗体由Santa Cruz Corp.Shanghai, China人工合成和纯化。流式细胞仪FACStar flow cytometer (Becton Dickinson, SanJose, CA, USA)。
方法：对Wistar大鼠的海马神经元进行原代培养，培养7d后，进行如下干预：对照组（加0.01mol/L PBS）、醋酸铅0.2, 1.0和10μmol/ L组（分别加入0.2, 1.0和10μmol/ L的醋酸铅）。4组海马神经神经元经以上措施干预后继续培养24h。
主要观察指标：用流式细胞仪检测铅对细胞周期的影响，用彗星实验检测DNA损伤情况，用Western印迹法检测cyclinD1表达量。
结果：细胞周期阻断：相比对照组，醋酸铅0.2μmol/L组无明显阻断细胞周期状况，在醋酸铅1.0和10μmol/L组明显增加了S和G1 期的细胞数量（P<0.05）。DNA损伤：醋酸铅组中的DNA的尾距（OTM）和彗尾值（% tail）相比对照组，醋酸铅1.0和10μmol/L组明显高(P<0.05)。醋酸铅0.2μmol/L组的彗尾高于对照组，差异无显著性意义（P>0.05）。细胞周期蛋白D1表达：随着醋酸铅组浓度从 0.2，1.0 至 10μmol/L 逐渐增高，cyclinD1 的蛋白表达呈逐渐下降趋势。
结论：实验结果揭示铅可以使原代培养的大鼠海马神经元细胞发生DNA损伤，且呈剂量依赖性，可以使海马神经元细胞发生细胞周期阻断，并使cyclinD1 的蛋白表达降低。
关键词：铅；细胞周期阻断；DNA损伤；细胞周期素蛋白；海马神经元

本实验先进性及创新性评价：
2009-05-07通过国内的万方数据检索了(1)医药期刊全文数据库,(2)中华医学会期刊数据库,(3)中国医药学术会议论文全文数据库,及PubMed检索国外文献得出以下结论。所用检索关键词为:海马神经元，铅，细胞周期阻断,DNA损伤.
铅对大鼠海马神经元细胞的损伤及细胞周期的阻断的研究甚少见。国内仅检索到2个作者发表的铅对神经元细胞的损伤的研究[如:(1) 涂白杰 , 胡雪原 , 韩令力.苯并 a 芘和铅对小鼠大脑神经元损伤的研究.环境与职业医学 2005 ，22（2）:127-129.(2) 涂白杰; 程淑群; 胡雪原,苯并a 芘、铅单独及联合作用对体外神经元.卫生研究,2004,33(6):660-662.]目前国内外尚无铅对大鼠海马神经元细胞损伤机制的分子水平研究。海马是学习记忆的关键部位，通过铅对海马神经元细胞损伤研究的探讨，有助于揭示铅对海马神经元细胞的损伤机制，以更好地抑制铅损伤人类尤其是青少年儿童的学习记忆,造福人类。

对专家审稿问题的思考：
1.问题：该实验为随机对照体外实验，如果能够结合在体实验，比如动物学习记忆行为学判定其损害作用和机制，可使研究更深入。
思考：课题组一直从事铅对海马学习记忆损伤的研究，大量的在体实验数据结果本课题组已经在先期发表论文如下：高双等，细胞外信号调节激酶及蛋白激酶Cγ亚型在慢性染铅小鼠脑海马中的异常表达《中国医科大学学报 》2007  Vol.36 No.6。高双等，慢性铅暴露对小鼠海马PKC-γ蛋白表达影响《中国公共卫生》2008 Vol.24 No.7。高双等，PKC-γ和 ERK在慢性染铅小鼠脑皮质区的异常表达《中国医科大学学报》2008  Vol.37 No.5 。本课题组在以上在体实验的基础上设计出本实验，目的是从细胞水平检测铅的神经毒作用机制。
2.问题：铅对神经元毒性损伤的实验研究国内外已有大量报道，本文仅在其以往工作的基础上测定了DNA损伤、细胞周期阻断情况及细胞周期蛋白D1（cyclinD1）表达，应对相关指标的研究现状和意义做进一步解释。
思考：铅对海马神经的毒作用以及铅对学习记忆的损伤在国内外是公认的，但迄今为止国内外未有关于金属铅对原代培养大鼠海马神经元细胞损伤机制的文献报道。国内仅检索到2个作者发表的铅对神经元细胞的损伤的研究[如:(1) 涂白杰 , 胡雪原 , 韩令力.苯并 a 芘和铅对小鼠大脑神经元损伤的研究.环境与职业医学 2005 ，22（2）:127-129.(2) 涂白杰; 程淑群; 胡雪原,苯并a 芘、铅单独及联合作用对体外神经元.卫生研究,2004,33(6):660-662.目前国内外尚无铅对大鼠海马神经元细胞损伤机制的分子水平研究。海马是学习记忆的关键部位，通过铅对海马神经元细胞损伤研究的探讨，有助于揭示铅对海马神经元细胞的损伤机制，以更好地抑制铅损伤人类尤其是青少年儿童的学习记忆,造福人类。意义重大。